TSPAN18 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405937

Panoramica

TSPAN18 codifica una proteina di membrana della famiglia delle tetraspanine che contribuisce a organizzare i microdomini arricchiti in tetraspanine, coordinando interazioni laterali tra recettori, molecole di adesione e adattatori di segnalazione sulla membrana plasmatica. Attraverso queste funzioni di scaffold, TSPAN18 può influenzare processi quali la comunicazione cellula-cellula, il traffico di membrana e l’integrazione dei segnali che modellano i programmi di attivazione e motilità cellulari. L’espressione e la variabilità genetica delle tetraspanine, inclusa TSPAN18, sono state associate in letteratura a fenotipi legati alle piastrine e alla biologia vascolare, a supporto dell’impiego di questo bersaglio in studi sulla segnalazione associata all’emostasi e sulle risposte infiammatorie. L’analisi della funzione di TSPAN18 può chiarire come la composizione dei microdomini di membrana moduli le vie a valle rilevanti per i meccanismi di malattie cardiovascolari e immuno-associate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TSPAN18 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TSPAN18 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TSPAN18 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TSPAN18 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TSPAN18.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TSPAN18 per lo studio della segnalazione di TSPAN18, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TSPAN18 critici per la funzione di TSPAN18
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TSPAN18 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TSPAN18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TSPAN18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TSPAN18. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TSPAN18 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TSPAN18 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TSPAN18 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TSPAN18 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.