TSHZ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431049-ACT

Tshz1 codifica o fator de transcrição homeobox do tipo dedo de zinco TSHZ1, um regulador nuclear de programas gênicos do desenvolvimento que moldam o padrão dos tecidos e as decisões de destino celular no camundongo. O TSHZ1 integra o controle transcricional em processos associados à morfogênese, incluindo diferenciação, organogênese e manutenção da identidade específica de linhagem, por meio da regulação de promotores e enhancers dependente do contexto. A atividade desregulada de TSHZ1 tem sido implicada em fenótipos congênitos e do neurodesenvolvimento em estudos genéticos, tornando-o um nó útil para dissecar redes transcricionais que acoplam a sinalização do desenvolvimento à diferenciação terminal. A modulação da expressão de Tshz1 sustenta estudos mecanísticos sobre circuitos regulatórios gênicos em modelos embrionários e derivados de células-tronco, bem como o mapeamento de vias em sistemas nos quais fatores homeobox coordenam estados de cromatina e transcrição.

TSHZ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tshz1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TSHZ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tshz1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tshz1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TSHZ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tshz1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TSHZ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TSHZ1 em células tumorais com expressão de Tshz1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.