TRRAP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402748-ACT

TRRAP（transformation/transcription domain-associated protein）は大型のアダプタータンパク質で、SAGAやTIP60を含む複数のヒストンアセチル化酵素（HAT）複合体にとって必須の補因子として機能し、配列特異的転写因子とクロマチンリモデリングをつなぐ役割を担います。アセチル化依存的な遺伝子発現制御を統合することで、TRRAPは細胞周期の進行、DNA損傷応答、分化プログラムに影響します。MYCおよびE2Fの転写ネットワークにより制御される経路に関与し、修復や複製関連ストレスのクロマチン介在性制御を通じてゲノム完全性の維持を支えます。TRRAP活性の破綻や複合体アセンブリの変化は、がん原性の転写状態や神経発生に関わる表現型と関連づけられており、エピジェネティック制御の機構研究における重要な標的となっています。

TRRAP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRRAPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRRAP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRRAP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRRAP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRRAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRRAP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRRAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRRAP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRRAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。