TRPV5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403668-ACT

TRPV5は、カルシウムに対して非常に高い選択性を持ち、恒常的に活性化しているTRPカチオンチャネルをコードしており、主として上皮細胞の頂端膜に局在して経細胞性のCa2+流入を担います。チャネル活性は、カルビンディンによる緩衝作用や、Na+/Ca2+交換体およびCa2+-ATPaseによる基底側での排出など、カルシウム恒常性維持経路と協調して制御され、細胞内Ca2+、pH、カルシウム調節性シグナルなどの因子によって調節されます。TRPV5の機能は上皮のイオン輸送プログラムとカルシウム再吸収の生理機構に密接に結び付いており、ミネラル代謝や上皮バリアを介した輸送を研究するうえで重要なノードとなります。TRPV5の発現や活性の破綻はカルシウム取り扱いの表現型変化と関連しており、腎性および全身性のカルシウムバランス異常の文脈で検討されています。

TRPV5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRPV5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRPV5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRPV5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRPV5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRPV5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRPV5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRPV5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRPV5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRPV5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。