Plásmido CRISPR de Activación (h) TRPC7: sc-403911-ACT

TRPC7 codifica un canal catiónico no selectivo permeable al calcio de la familia de canales canónicos de potencial receptor transitorio (TRPC), que contribuye a la entrada de Ca2+ operada por receptor tras la señalización de receptores acoplados a PLC y la producción de diacilglicerol. Al modular la dinámica intracelular de Ca2+, TRPC7 influye en la despolarización de la membrana y en nodos de señalización posteriores, como las vías dependientes de CaM, las cascadas de MAPK y los programas de transcripción impulsados por NFAT. La actividad de TRPC7 se ha relacionado con la regulación de la excitabilidad celular, la secreción y la remodelación del citoesqueleto en diversos tipos celulares. La señalización alterada de canales TRP, incluida la desregulación de la familia TRPC, se estudia con frecuencia en el contexto de una homeostasis del calcio aberrante, relevante para fenotipos de enfermedad cardiovascular, neurológica y proliferativa.

TRPC7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRPC7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRPC7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRPC7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRPC7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRPC7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRPC7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRPC7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRPC7 en células tumorales con expresión de TRPC7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.