TRPC7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403911-ACT

TRPC7 codifica um canal de cátions não seletivo, permeável a cálcio, da família dos canais canônicos de potencial receptor transitório (TRPC), que contribui para a entrada de Ca2+ operada por receptor após a sinalização de receptores acoplados à PLC e a produção de diacilglicerol. Ao modular a dinâmica intracelular de Ca2+, o TRPC7 influencia a despolarização da membrana e nós de sinalização a jusante, como vias dependentes de CaM, cascatas de MAPK e programas transcricionais dirigidos por NFAT. A atividade de TRPC7 tem sido associada à regulação da excitabilidade celular, secreção e remodelamento do citoesqueleto em diversos tipos celulares. Alterações na sinalização de canais TRP, incluindo a desregulação da família TRPC, são frequentemente estudadas no contexto de uma homeostase de cálcio anômala relacionada a fenótipos de doenças cardiovasculares, neurológicas e proliferativas.

TRPC7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRPC7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRPC7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRPC7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRPC7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRPC7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRPC7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRPC7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRPC7 em células tumorais com expressão de TRPC7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.