Troponin I-C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423459

Panoramica

Tnni3 codifica l’isoforma cardiaca della troponina I, che forma un complesso regolatorio con la troponina T e la troponina C sul filamento sottile per controllare l’interazione actina–miosina durante l’accoppiamento eccitazione–contrazione. Attraverso la modulazione Ca²⁺-dipendente dell’attività ATPasica della miosina, la troponina I contribuisce a regolare finemente la contrattilità e il rilasciamento del sarcomero, integrando input di segnalazione quali la fosforilazione mediata da chinasi, che modifica la sensibilità al Ca²⁺ dei miofilamenti. Nei cardiomiociti di topo, Tnni3 è centrale per l’organizzazione dei sarcomeri e per i processi di gestione del calcio che sostengono la gittata cardiaca. Alterazioni della funzione o della regolazione della troponina I sono comunemente studiate nel contesto dei meccanismi della cardiomiopatia, della disfunzione contrattile e dei fenotipi di rimodellamento indotti dallo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin I-C (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnni3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnni3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnni3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Troponin I-C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnni3 per lo studio della segnalazione di Troponin I-C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnni3 critici per la funzione di Troponin I-C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnni3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Troponin I-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Troponin I-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnni3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Troponin I-C Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Troponin I-C (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnni3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnni3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.