TRIM35 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405277-ACT

TRIM35 codifica uma ligase E3 de ubiquitina da família tripartite motif (TRIM), implicada na regulação do turnover proteico e da sinalização imune inata. Por meio de sua arquitetura RING/B-box/coiled-coil, a TRIM35 pode influenciar processos dependentes de ubiquitina que moldam respostas antivirais, sinalização de estresse e a manutenção da homeostase celular. A alteração da expressão de TRIM35 ou a desregulação de vias de ubiquitinação têm sido associadas a fenótipos relevantes para a inflamação e a biologia do câncer, tornando a TRIM35 um nó útil para estudos mecanísticos da fidelidade da sinalização. Em modelos celulares humanos, a TRIM35 é frequentemente investigada por suas contribuições para o crosstalk entre a vigilância imunológica e o controle do crescimento.

TRIM35 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIM35 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRIM35 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIM35 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIM35, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRIM35. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIM35 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRIM35 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRIM35 em células tumorais com expressão de TRIM35 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.