TRIM16 Double Nickaseプラスミド (h): sc-409792-NIC

TRIM16は、E3ユビキチンリガーゼおよび足場（スキャフォールディング）因子として機能するTRIM（tripartite motif）ファミリータンパク質をコードしており、タンパク質分解回転、細胞骨格ダイナミクス、ならびにストレス応答性シグナル伝達の協調に関与します。TRIM16は、中間径フィラメントの構築制御、プロテオスタシス（タンパク質恒常性）、そして細胞分化や細胞運動に影響を与える転写プログラムの調節と関連付けられています。ユビキチン依存的な機構やタンパク質間相互作用を介して、TRIM16は自然免疫応答、酸化ストレスへの適応、増殖制御を司る経路に影響を及ぼし得ます。TRIM16の発現量や活性の変化は、腫瘍生物学や炎症性表現型と関連することが報告されており、シグナル伝達ネットワークや細胞恒常性の機構研究における有用な標的となっています。

TRIM16 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TRIM16 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TRIM16内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TRIM16の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TRIM16が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。