Trichohyalin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401940-ACT

TCHH codifica a tricohialina, uma proteína estrutural altamente reticulada, enriquecida na bainha radicular interna dos folículos pilosos e em queratinócitos em diferenciação. A tricohialina é um importante substrato para peptidilarginina desiminases e transglutaminases, sustentando a citrulinização e a reticulação por ligações isopeptídicas que estabilizam o envelope córneo e reforçam a mecânica da barreira epitelial. Por meio de sua integração com filamentos intermediários de queratina e com o programa de queratinização, TCHH contribui para a morfogênese folicular, a arquitetura da haste do pelo e a diferenciação epidérmica. A expressão ou o processamento desregulados da tricohialina têm sido associados a fenótipos de cabelo e pele, o que a torna relevante para estudos de biologia do folículo, distúrbios de barreira e respostas epiteliais ao estresse.

Trichohyalin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TCHH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Trichohyalin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TCHH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TCHH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Trichohyalin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TCHH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Trichohyalin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Trichohyalin em células tumorais com expressão de TCHH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.