TRF2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401289-ACT

ヒトTERF2は、テロメア反復配列結合因子2（TRF2）をコードしており、二本鎖テロメアDNAに結合してtループ形成を促進し、染色体末端がDNA二本鎖切断として認識されるのを防ぐ、シェルテリン複合体の中核構成要素です。TRF2はATM依存的なDNA損傷シグナル伝達を抑制し、テロメアでの不適切な非相同末端結合（NHEJ）を防ぐことで染色体同士の端‐端融合を制限し、結果としてゲノム安定性と適切な細胞周期進行を支えます。テロメアのキャッピング、複製、テロメア長の恒常性維持における役割を通じて、TERF2はテロメア生物学をDNA修復およびチェックポイント経路と協調させるのに寄与します。TRF2の発現や機能の破綻はテロメア機能不全の表現型と関連づけられており、加齢関連プロセスやがん生物学に伴うゲノム不安定性の文脈でしばしば研究されています。

TRF2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TERF2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRF2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TERF2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTERF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRF2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTERF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRF2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTERF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRF2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。