Plásmido CRISPR de Activación (m) TREML2: sc-435918-ACT

Treml2 codifica el receptor desencadenante expresado en células mieloides tipo 2 (TREML2), un receptor de membrana tipo I enriquecido en células del linaje mieloide e implicado en la detección inmunitaria innata y en la señalización inflamatoria. TREML2 se ha asociado con la modulación de los estados de activación de la microglía y los macrófagos, influyendo en la producción de citocinas, las respuestas fagocíticas y la comunicación con la inmunidad adaptativa. A través de estos procesos, Treml2 se estudia con frecuencia en vías que regulan la neuroinflamación y la homeostasis de células mieloides residentes en tejidos, con relevancia para modelos de neurodegeneración, inflamación autoinmune e infección. Su localización en la superficie celular y su expresión dependiente del contexto lo convierten en un nodo útil para analizar la regulación inmunitaria mediada por receptores en sistemas murinos.

TREML2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Treml2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TREML2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Treml2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Treml2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TREML2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Treml2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TREML2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TREML2 en células tumorales con expresión de Treml2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.