TREM-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401585-ACT

TREM2 codifica o receptor desencadeador expresso em células mieloides 2 (TREM-2), um imunorreceptor expresso principalmente em micróglia e noutras linhagens mieloides, que modula a deteção imunitária inata, a fagocitose e o metabolismo/gestão de lípidos. Por associação com o adaptador TYROBP/DAP12, o TREM-2 sinaliza por vias dependentes de SYK, influenciando a produção de citocinas, a quimiotaxia, a sobrevivência e a reprogramação metabólica durante a vigilância tecidular. No sistema nervoso central, o TREM-2 contribui para as respostas da micróglia a detritos celulares e a proteínas agregadas, ligando-o a processos neuroinflamatórios e a mecanismos de risco implicados em doenças neurodegenerativas. A desregulação da sinalização do TREM-2 também é estudada na polarização de macrófagos e na biologia mieloide associada a tumores, sustentando investigação centrada em vias de inflamação e regulação imunitária.

TREM-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TREM2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TREM-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TREM2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TREM2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TREM-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TREM2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TREM-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TREM-2 em células tumorais com expressão de TREM2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.