TRB-3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401746-LAC

TRIB3 codifica a pseudocinase tribbles 3 (TRB-3), um adaptador semelhante a uma cinase, porém cataliticamente inativo, que modula a transdução de sinal ao atuar como plataforma (“scaffold”) para interações proteína–proteína. A TRB-3 é mais conhecida por regular negativamente o eixo PI3K/AKT por meio da interação com a AKT, influenciando assim a sinalização de insulina, o metabolismo celular e programas adaptativos ao estresse. Ela também integra respostas ao estresse do retículo endoplasmático e pode interagir com vias relacionadas a MAPK e TGF-β/SMAD, moldando a sobrevivência celular, a diferenciação e a sinalização inflamatória. A expressão desregulada de TRIB3 tem sido associada a disfunção metabólica, processos cardiovasculares e neurodegenerativos, e a fenótipos relevantes para o câncer, como alteração da apoptose e tolerância ao estresse terapêutico, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos focados em vias.

As Partículas de Ativação Lentivirais TRB-3 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TRIB3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TRB-3 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TRIB3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TRB-3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TRIB3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.