CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
TRAP Double Nickaseプラスミド (h): sc-400892-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TRAP Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- TRAPダブルニカースプラスミド（h）およびTRAPダブルニカースプラスミド（h2）は、ACP5を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TRAP 抗体 (D-3): sc-376875
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TRAP Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400892-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRAP Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400892-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACP5は酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ（TRAP）をコードしており、TRAPは破骨細胞および活性化マクロファージに多く発現する金属酵素で、酸性コンパートメント内でリン酸エステルを加水分解します。TRAPは、細胞外およびエンドソーム内の基質を脱リン酸化することで、骨基質リモデリング、小胞輸送、ならびに酸化還元関連プロセスに寄与し、RANKL–NF-κBおよびMAPKシグナル伝達の下流にある破骨細胞分化プログラムと整合します。ACP5/TRAP活性の変化は、骨代謝回転の破綻や炎症性表現型と関連しており、骨溶解性疾患の機序や免疫細胞の活性化状態の文脈でしばしば研究されています。ヒト細胞モデルでは、ACP5は破骨細胞形成、リソソーム生物学、マクロファージの極性化経路を検討するための機能的マーカーであり、機構解析上の重要な結節点として用いられます。
TRAP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACP5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACP5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACP5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACP5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。