Transketolase Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-423410-NIC

O gene **Tkt** de camundongo codifica a **transcetolase**, uma enzima dependente de **pirofosfato de tiamina** que catalisa reações reversíveis de transferência de **dois carbonos** no ramo **não oxidativo** da via das **pentoses fosfato**. Ao interconverter fosfatos de açúcares como **xilulose-5-fosfato**, **ribose-5-fosfato** e **frutose-6-fosfato**, a transcetolase liga a biossíntese de nucleotídeos ao fluxo glicolítico e dá suporte indireto ao equilíbrio redox celular por meio da coordenação com a atividade do ramo oxidativo da PPP. Assim, a função de Tkt é relevante para o metabolismo proliferativo, a manutenção de sistemas antioxidantes dependentes de **NADPH** e as demandas anabólicas em células de rápida divisão. A desregulação de enzimas da PPP, incluindo a transcetolase, tem sido associada a alterações na homeostase metabólica e a fenótipos de estresse oxidativo amplamente estudados em contextos de pesquisa metabólica e de neurodegeneração.

Transketolase O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Tkt em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Tkt. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Tkt. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Tkt interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.