transgelin Double Nickaseプラスミド (h): sc-401343-NIC

TAGLNはトランスゲリン（transgelin）をコードしており、トランスゲリンは平滑筋や筋線維芽細胞様細胞に豊富に発現するアクチン結合タンパク質で、線維状アクチンを安定化し、収縮性の細胞骨格アーキテクチャを支えます。トランスゲリンは、RhoA/ROCKをはじめとするアクチン動態制御経路の下流で、細胞骨格リモデリング、細胞形状の制御、運動プログラムに関与し、接着や細胞外マトリックス（ECM）との相互作用にも影響します。TAGLNの発現変化は、平滑筋分化や表現型スイッチの指標としてしばしば用いられ、さまざまな状況における組織リモデリングや腫瘍—間質（ストローマ）相互作用の生物学的変化とも関連づけられています。これらの特徴により、TAGLNは、アクチンの組織化と収縮性が細胞移動、メカノトランスダクション、系譜関連遺伝子プログラムをどのように制御するかを解析するうえで実用的な標的となります。

transgelin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TAGLN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TAGLN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TAGLNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TAGLNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。