TRAF7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404992-ACT

O TRAF7 humano codifica uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING e uma proteína adaptadora da família dos fatores associados ao receptor de TNF, que modula a transdução de sinal por meio do controle, dependente de ubiquitina, da estabilidade proteica e da montagem de complexos. O TRAF7 tem sido associado à regulação de processos ligados a MAPK e NF-κB, moldando programas transcricionais que influenciam respostas ao estresse celular, apoptose e sinalização inflamatória. Por meio de sua atividade de ubiquitinação, o TRAF7 pode afetar a comunicação cruzada entre a sinalização imune inata e vias de fatores de crescimento que governam a homeostase celular. Alterações na função do TRAF7 e sinalização desregulada foram relatadas em contextos relevantes para a biologia tumoral e para a fisiopatologia do desenvolvimento, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos do “encadeamento” de vias.

TRAF7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRAF7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRAF7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRAF7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRAF7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRAF7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRAF7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRAF7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRAF7 em células tumorais com expressão de TRAF7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.