TRAF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423492

Panoramica

Traf1 codifica il fattore associato al recettore del fattore di necrosi tumorale 1 (TRAF1), una proteina adattatrice che collega i membri della superfamiglia dei recettori del TNF a complessi di segnalazione a valle. In contesti immunitari e infiammatori, TRAF1 modula la segnalazione NF-κB canonica e non canonica, influenza gli output della via MAPK e contribuisce a determinare le decisioni tra apoptosi e sopravvivenza tramite interazioni con proteine quali TRAF2 e le cIAP. Queste attività concorrono alla regolazione delle risposte citochiniche, all’attivazione dei linfociti e alla segnalazione dell’immunità innata, rendendo Traf1 un nodo utile per analizzare l’integrazione dei segnali nelle cellule immunitarie. L’alterazione delle vie associate a TRAF1 è stata implicata nei meccanismi delle malattie infiammatorie e nella segnalazione del microambiente rilevante per l’immuno-oncologia, a supporto della sua ampia utilità in modelli di ricerca focalizzati sulle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Traf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Traf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Traf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRAF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Traf1 per lo studio della segnalazione di TRAF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Traf1 critici per la funzione di TRAF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Traf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRAF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRAF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Traf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRAF1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRAF1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Traf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Traf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.