TR4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423490

Panoramica

Nr2c2 codifica per il recettore nucleare orfano TR4 (testicular receptor 4), un fattore di trascrizione indipendente dal ligando che si lega agli elementi di risposta ormonale per regolare programmi genici coinvolti nello sviluppo, nel metabolismo e nelle decisioni di destino cellulare. Nei sistemi murini, TR4 si integra nelle reti di segnalazione dei recettori nucleari e influenza il controllo trascrizionale dell’omeostasi di lipidi e glucosio, della funzione mitocondriale e dei processi di differenziamento in contesti riproduttivi, neurali e immuno-correlati. L’attività di TR4 è stata associata alla modulazione della segnalazione infiammatoria e delle risposte cellulari allo stress attraverso ampi effetti trascrizionali, rendendo Nr2c2 un nodo utile per studiare il cross-talk tra vie di segnalazione. La disregolazione dell’espressione genica associata a TR4 è stata indagata in modelli di disfunzione metabolica, neurobiologia e fenotipi oncogeni, a supporto della sua rilevanza per la ricerca meccanicistica senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TR4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nr2c2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nr2c2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nr2c2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TR4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nr2c2 per lo studio della segnalazione di TR4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nr2c2 critici per la funzione di TR4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nr2c2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TR4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TR4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nr2c2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TR4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TR4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nr2c2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nr2c2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.