TR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423490

概要

Nr2c2 は、孤児核内受容体 TR4（testicular receptor 4）をコードしており、リガンド非依存性の転写因子としてホルモン応答エレメントに結合し、発生、代謝、細胞運命決定に関与する遺伝子プログラムを制御します。マウスの系では、TR4 は核内受容体シグナル伝達ネットワークと統合的に作用し、脂質およびグルコース恒常性、ミトコンドリア機能、ならびに生殖・神経・免疫関連の文脈における分化過程の転写制御に影響を与えます。TR4 の活性は、広範な転写作用を介して炎症シグナルや細胞ストレス応答の調節と関連づけられており、Nr2c2 は経路間クロストークを研究するうえで有用なノードとなります。TR4 に関連する遺伝子発現の破綻は、代謝異常、神経生物学、腫瘍性表現型のモデルで検討されており、臨床的転帰を示唆することなく機序研究における重要性が支持されています。

TR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNr2c2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nr2c2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nr2c2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TR4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TR4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nr2c2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TR4の機能に不可欠なNr2c2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nr2c2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nr2c2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TR4 HDRプラスミド（m）および TR4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNr2c2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNr2c2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。