TRβ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401467-ACT

THRBは甲状腺ホルモン受容体β（TRβ）をコードしており、トリヨードチロニン（T3）に結合するリガンド依存性の核内受容体である。TRβは甲状腺ホルモン応答エレメントを介して転写を制御し、コレギュレーターとの相互作用やRXRとのクロストーク、さらにMAPK/PI3Kシグナル伝達との連関を通じて、細胞代謝、ミトコンドリア機能、脂質・糖代謝の恒常性、発生・分化に関わる遺伝子プログラムを統括する。THRB活性の変化は内分泌シグナルの破綻や代謝表現型の異常と関連し、TRβが媒介する転写ネットワークの攪乱は、甲状腺ホルモン不応症やホルモン応答性がんなどの文脈で研究されている。ヒト細胞においてTRβは、核内受容体のクロマチン占有、補因子依存性、刺激応答性の遺伝子制御を解析するためのモデル転写因子として用いられる。

TRβ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性THRBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRβ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における THRB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTHRB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRβの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTHRB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRβ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTHRB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRβ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。