TPH2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402296-ACT

TPH2（トリプトファン水酸化酵素2）は、セロトニン（5-ヒドロキシトリプタミン）生合成における神経系の律速酵素をコードしており、セロトニン作動性ニューロン内でL-トリプトファンを5-ヒドロキシ-L-トリプトファンへ水酸化する反応を触媒します。セロトニンの利用可能性を規定する主要因子として、TPH2は気分、ストレス応答性、睡眠–覚醒の調節、侵害受容、自律機能を調節する神経伝達プログラムに影響を与えます。TPH2の発現変化や遺伝的多型は、セロトニン作動性シグナル伝達の関与が示唆される神経精神・神経発達関連の表現型（感情特性や不安関連特性を含む）との関連で検討されてきました。細胞モデルでは、TPH2活性はモノアミン代謝、シナプス可塑性、活動依存的な遺伝子発現制御を司る経路と交差します。

TPH2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TPH2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TPH2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TPH2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTPH2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TPH2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTPH2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTPH2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTPH2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTPH2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。