Topo IIIα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404439

Panoramica

TOP3A codifica la DNA topoisomerasi IIIα umana, una topoisomerasi di tipo IA che risolve intermedi topologici del DNA a singolo filamento durante la replicazione, la ricombinazione e la riparazione del DNA. La Topo IIIα opera nel complesso BTRR insieme a BLM, RMI1 e RMI2 per dissolvere le doppie giunzioni di Holliday, sopprimere eventi di crossing-over aberranti e mantenere la stabilità del genoma durante la ricombinazione omologa. Supporta inoltre il mantenimento del DNA mitocondriale attraverso la cooperazione con fattori di replicazione e riparazione specifici dell’organello, collegando TOP3A all’integrità dei genomi nucleare e mitocondriale. L’alterazione delle vie associate a TOP3A è rilevante per fenotipi di instabilità genomica ed è stata collegata a patologie ereditarie caratterizzate da difetti nella riparazione del DNA e da sensibilità allo stress replicativo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Topo IIIα (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TOP3A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TOP3A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TOP3A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Topo IIIα.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TOP3A per lo studio della segnalazione di Topo IIIα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TOP3A critici per la funzione di Topo IIIα
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TOP3A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Topo IIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Topo IIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TOP3A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Topo IIIα Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Topo IIIα (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TOP3A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TOP3A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.