Topo I CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400965-ACT
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Topo I CRISPR Activationプラスミド (h)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- Topo I CRISPR Activationプラスミド (h)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
- 得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- Topo I CRISPR活性化プラスミド（h）およびTopo I CRISPR活性化プラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TOP1転写開始点の上流にある異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Topo I 抗体 (C-21): sc-32736
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Topo I CRISPR Activationプラスミド (h) | sc-400965-ACT | 20 µg | $397.00 |
ヒトTOP1はDNAトポイソメラーゼI（Topo I）をコードしており、Topo Iは核内酵素として、DNA複製および転写の過程で生じるねじれ応力（トーションストレス）を、一本鎖の一過性切断を形成してDNAを再結合することで解消します。この活性はDNA損傷応答シグナル、クロマチンダイナミクス、ゲノム安定性の維持を支え、TOP1の機能を細胞周期の進行や転写恒常性と結び付けています。TOP1の発現や活性が乱れると、複製ストレスへの耐性やゲノム完全性が変化し、これらはがん生物学やDNA修復不全の文脈で頻繁に研究される特徴です。TOP1依存的なプロセスは、転写に関連したゲノム不安定性の研究や、トポイソメラーゼ阻害薬（topoisomerase poisons）に対する細胞応答の解析にも関与します。
Topo I CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TOP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
Topo I CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TOP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTOP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Topo Iの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTOP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTopo I依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTOP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTopo I経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。