TOB1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402842-ACT

Il gene umano **TOB1** codifica un membro antiproliferativo della famiglia **BTG/TOB**, che modula programmi trascrizionali responsabili del controllo della progressione del ciclo cellulare, della differenziazione e dell’apoptosi. TOB1 agisce come coregolatore trascrizionale dipendente dal contesto e interagisce con reti di segnalazione quali le vie **TGF-β/SMAD** e **MAPK**, contribuendo a modellare l’espressione genica a valle di segnali extracellulari. Influenzando il turnover dell’mRNA e i complessi di repressione/attivazione trascrizionale, TOB1 partecipa agli stati di attivazione delle cellule immunitarie e, più in generale, al controllo omeostatico della crescita. Un’espressione o un equilibrio di segnalazione di TOB1 alterati sono stati associati a modifiche della funzione linfocitaria e a processi oncogeni, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca in biologia del cancro e immunologia.

TOB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TOB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TOB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TOB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TOB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TOB1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TOB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TOB1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TOB1 nelle cellule tumorali con espressione di TOB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.