TNF-R1 Double Nickaseプラスミド (m2): sc-423442-NIC-2
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TNF-R1 Double Nickaseプラスミド (m2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- TNF-R1ダブルニカースプラスミド（m2）およびTNF-R1ダブルニカースプラスミド（m22）は、Tnfrsf1aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TNF-R1 抗体 (H-5): sc-8436
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TNF-R1 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-423442-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのTnfrsf1aは腫瘍壊死因子受容体1（TNF‑R1）をコードしており、TNFに結合して炎症、細胞生存、プログラム細胞死を制御するシグナル伝達を開始する、全身の多くの組織で発現するTNF受容体である。リガンド結合によりTNF‑R1は膜上および細胞質のシグナル伝達複合体を形成し、NF‑κBやMAPKの活性化に加えて、カスパーゼ依存性アポトーシスやRIPK介在性ネクロプトーシスを調節することで、自然免疫からの刺激を転写応答および細胞死経路へと結び付ける。TNF‑R1シグナルの破綻は、炎症性・自己免疫性の病態生理、神経炎症過程、ならびに組織傷害応答に関与するとされ、Tnfrsf1aはサイトカイン駆動性の恒常性を研究する上で重要な結節点となる。マウスモデルにおけるTnfrsf1aの遺伝子編集は、TNFシグナル伝達ネットワークの機序解明、受容体ドメイン機能の解析、そして免疫介在性疾患表現型に対する細胞種特異的な寄与の検討を可能にする。
TNF-R1 ダブルニカースプラスミド（m2）は、mouse 細胞株における Tnfrsf1a 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Tnfrsf1a内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Tnfrsf1aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Tnfrsf1aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。