TNF-R1 Plasmide Double Nickase (m2): sc-423442-NIC-2
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TNF-R1 Plasmide Double Nickase (m2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TNF-R1 Double Nickase Plasmid (m2) e il TNF-R1 Double Nickase Plasmid (m22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tnfrsf1a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TNF-R1 Antibody (H-5): sc-8436
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TNF-R1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423442-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Tnfrsf1a codifica il recettore 1 del fattore di necrosi tumorale (TNF‑R1), un recettore del TNF espresso in modo ubiquitario che lega il TNF e avvia una trasduzione del segnale che controlla l’infiammazione, la sopravvivenza cellulare e la morte cellulare programmata. In seguito al legame con il ligando, TNF‑R1 assembla complessi di segnalazione di membrana e citosolici che regolano l’attivazione di NF‑κB e delle MAPK, nonché l’apoptosi dipendente dalle caspasi e la necroptosi mediata da RIPK, collegando i segnali dell’immunità innata a vie trascrizionali e di morte cellulare. La deregolazione della segnalazione di TNF‑R1 è implicata nella fisiopatologia infiammatoria e autoimmune, nei processi neuroinfiammatori e nelle risposte al danno tissutale, rendendo Tnfrsf1a un nodo chiave per lo studio dell’omeostasi guidata dalle citochine. L’editing genetico di Tnfrsf1a in modelli murini consente l’analisi meccanicistica delle reti di segnalazione del TNF, della funzione dei domini recettoriali e dei contributi specifici dei diversi tipi cellulari ai fenotipi di malattia mediati dal sistema immunitario.
TNF-R1 Il plasmide Double Nickase (m2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tnfrsf1a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tnfrsf1a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tnfrsf1a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tnfrsf1a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.