TNF-R1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400206-NIC

TNFRSF1AはTNF-R1をコードしており、TNF-αに結合して炎症、細胞生存、プログラム細胞死を制御するシグナル伝達を開始する、広く発現する受容体です。リガンド結合により受容体関連複合体の形成が促進され、正統型NF-κB経路およびMAPK経路を活性化してサイトカイン産生やストレス応答遺伝子プログラムを誘導する一方、特定の制御状況下ではカスパーゼ依存的アポトーシスやネクロプトーシスへとシフトすることもあります。こうした経路分岐を通じて、TNF-R1は自然免疫の活性化、組織恒常性、ならびに血管内皮・上皮バリアの応答に影響を与えます。TNFRSF1Aシグナルの破綻や受容体機能に影響するバリアントは、自己炎症性表現型やより広範な炎症性疾患機序と関連づけられており、TNF駆動性ネットワークの挙動を解析するうえで一般的な標的となっています。

TNF-R1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TNFRSF1A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TNFRSF1A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TNFRSF1Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TNFRSF1Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。