TNFα-IP 2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401685-ACT

TNFAIP2（TNFα誘導性タンパク質2；TNFα-IP2）は、TNFαやその他のNF-κB活性化刺激によって誘導される、炎症応答性の遺伝子であり、サイトカインシグナル伝達を細胞リモデリングのプログラムと結び付ける役割を担います。このタンパク質は、アクチン細胞骨格ダイナミクス、膜輸送、細胞運動の制御への関与が示唆されており、免疫系および間質系の環境における接着や遊走などの過程を支えます。TNFAIP2の発現は炎症が活性化した状態と連動して変動し、自然免疫シグナル、血管／内皮の活性化、組織リモデリングを結ぶ経路の研究でしばしば解析対象となります。TNFAIP2の制御異常は病的な炎症やがん関連の表現型と関連づけられており、NF-κB依存的な転写出力が細胞の挙動をどのように形作るかを解明するための機構研究が進められています。

TNFα-IP 2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNFAIP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TNFα-IP 2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNFAIP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNFAIP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TNFα-IP 2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNFAIP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTNFα-IP 2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNFAIP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTNFα-IP 2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。