TNAP Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400784-NIC

ALPL codifica a fosfatase alcalina não específica de tecido (TNAP), uma ectoenzima ancorada por glicosilfosfatidilinositol que hidrolisa monoésteres de fosfato extracelulares para regular o equilíbrio entre fosfato inorgânico e pirofosfato. Ao degradar o pirofosfato, a TNAP modula processos de mineralização e favorece a maturação adequada da matriz óssea e dentária, além de influenciar a sinalização purinérgica por meio da desfosforilação de nucleotídeos no meio extracelular. A atividade de ALPL/TNAP interage com vias que controlam a homeostase do fosfato e a calcificação da matriz extracelular, e alterações na sua função estão associadas à hipofosfatasia e a fenótipos de calcificação patológica. Por ser uma enzima exposta na superfície celular com atividade catalítica mensurável, a TNAP oferece um alvo acessível para estudar relações genótipo-fenótipo no metabolismo mineral e em modelos de diferenciação celular.

TNAP O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ALPL em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ALPL. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ALPL. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ALPL interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.