TMPRSS4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416288-ACT

TMPRSS4 (protease serina transmembranar 4) é uma protease serina transmembranar do tipo II expressa na superfície celular, onde pode modular a proteólise pericelular, a remodelação da matriz extracelular e o comportamento de células epiteliais. Ao influenciar a sinalização ativada por proteases e as interações célula–célula ou célula–matriz, a TMPRSS4 está associada a processos como migração, invasão e transição epitélio–mesênquima. Alterações na expressão de TMPRSS4 foram relatadas em múltiplos contextos de tumores sólidos e frequentemente se associam a fenótipos agressivos e potencial metastático, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de programas relacionados à invasão. A TMPRSS4 também é relevante para pesquisas sobre redes de proteases ancoradas à membrana que regulam o processamento de receptores e a sinalização downstream em tecidos epiteliais.

TMPRSS4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMPRSS4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMPRSS4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMPRSS4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMPRSS4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMPRSS4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMPRSS4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMPRSS4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMPRSS4 em células tumorais com expressão de TMPRSS4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.