TMEM98 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409870-ACT

TMEM98は、眼組織および神経組織に豊富に発現する多回膜貫通型タンパク質をコードしており、膜関連シグナル伝達と細胞恒常性の制御に関与すると考えられています。ヒトTMEM98は、細胞外マトリックスの構築や発生過程のパターニングに影響するプロセスと関連づけられており、組織形態形成や細胞間コミュニケーションにおける役割と整合的です。遺伝学的研究では、TMEM98の多様性が視神経や前眼部の異常を含む遺伝性の眼表現型と関連することが示されており、網膜および視神経の構造形成機構における重要性が示唆されます。これらの特徴から、TMEM98は、膜タンパク質が発生および疾患関連リモデリングにおいて転写プログラムや微小環境からのシグナルをどのように調節するかを研究するうえで有用な標的となります。

TMEM98 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEM98の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMEM98 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMEM98 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEM98転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMEM98の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEM98遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMEM98依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEM98発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMEM98経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。