TMEM8C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402487-ACT

TMEM8C（別名：myomaker）は、多回膜貫通型の膜タンパク質をコードしており、骨格筋の発生および再生過程における筋芽細胞融合に必須です。細胞膜上で機能して膜融合活性（フュージョン活性）を促進し、多核の筋管（ミオチューブ）形成に必要な筋形成制御ネットワークや膜リモデリング過程と協調して働きます。TMEM8Cの発現は筋細胞の分化プログラムと密接に結び付いているため、筋形成（myogenesis）の転写制御や細胞間融合機構を研究するうえで有用な切り口となります。筋芽細胞融合およびTMEM8C関連経路の破綻は、筋形成・筋修復の障害が主要な細胞表現型となる筋萎縮の実験モデルや遺伝性ミオパチーにおいても重要です。

TMEM8C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEM8Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMEM8C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMEM8C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEM8C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMEM8Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEM8C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMEM8C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEM8C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMEM8C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。