TMEM43 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402764-ACT

TMEM43 (proteína transmembranar 43), também conhecida como LUMA, é uma proteína da membrana nuclear interna que se associa à lâmina nuclear e contribui para a organização do envelope nuclear, a mecanotransdução e a manutenção da arquitetura nuclear. Ao interagir com lamínas e outros componentes do envelope, a TMEM43 influencia o posicionamento da cromatina e programas de regulação gênica ligados à diferenciação celular e a respostas ao estresse. Alterações na função de TMEM43 foram associadas a fenótipos cardíacos e neuromusculares, incluindo cardiomiopatia arritmogênica, destacando sua relevância para o estudo de mecanismos de doenças associadas ao envelope nuclear. Em modelos de células humanas, a perturbação de TMEM43 é frequentemente usada para investigar conexões entre estrutura nuclear, controle transcricional e estabilidade do estado celular.

TMEM43 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMEM43 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMEM43 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMEM43 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMEM43, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMEM43. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMEM43 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMEM43 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMEM43 em células tumorais com expressão de TMEM43 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.