TMEM43 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402764-ACT

TMEM43 (Transmembranprotein 43), auch bekannt als LUMA, ist ein Protein der inneren Kernmembran, das mit der Kernlamina assoziiert ist und zur Organisation der Kernhülle, zur Mechanotransduktion sowie zur Aufrechterhaltung der Kernarchitektur beiträgt. Durch die Interaktion mit Lamin(en) und weiteren Komponenten der Kernhülle beeinflusst TMEM43 die Positionierung von Chromatin und genregulatorische Programme, die mit Zelldifferenzierung und Stressantworten verknüpft sind. Eine veränderte TMEM43-Funktion wurde mit kardialen und neuromuskulären Phänotypen in Verbindung gebracht, einschließlich der arrhythmogenen Kardiomyopathie, was ihre Relevanz für die Untersuchung von Krankheitsmechanismen der Kernhülle unterstreicht. In menschlichen Zellmodellen wird eine Störung von TMEM43 häufig genutzt, um Zusammenhänge zwischen Kernstruktur, transkriptioneller Kontrolle und Stabilität des Zellzustands zu untersuchen.

TMEM43 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TMEM43-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TMEM43 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TMEM43-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TMEM43-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TMEM43-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TMEM43-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TMEM43-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TMEM43-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TMEM43-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.