TMEM215 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-408002-ACT-2

ヒトのTMEM215遺伝子は膜貫通タンパク質215（transmembrane protein 215）をコードしており、複数回膜貫通型の膜タンパク質であると予測され、細胞膜などの細胞内膜系に局在して膜構造の維持・編成、輸送関連プロセス、あるいはシグナル依存的な細胞恒常性の制御に寄与する可能性がある。TMEM215はなお十分に機能解明が進んでいないものの、発現解析や遺伝学的関連解析のデータから、細胞増殖・分化・ストレス応答に関わる経路との関連が示されており、組織生理において状況依存的な役割を担うことが示唆される。がんを含む疾患関連データセットやその他の複雑疾患においてTMEM215の発現パターンの変化が報告されていることから、膜タンパク質生物学の機能ゲノミクス研究における標的としての有用性も支持される。TMEM215を遺伝子編集することで、ヒト細胞モデルにおいて、サブセルラー局在、タンパク質間相互作用、ならびに下流の転写変化や表現型への影響を、機能喪失／機能獲得の観点から検証することが可能となる。

TMEM215 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEM215の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMEM215 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における TMEM215 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEM215転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMEM215の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEM215遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMEM215依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEM215発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMEM215経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。