TMEM2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407487-ACT

TMEM2は、細胞外マトリックス内のヒアルロン酸のターンオーバーを調節する、細胞外ヒアルロニダーゼ活性をもつI型膜貫通タンパク質をコードします。細胞周囲（ペリセルラー）のヒアルロン酸量を調整することで、TMEM2は細胞接着、遊走、メカノトランスダクションに影響し、発生期および成体の恒常性維持における組織リモデリング・プログラムを形作ります。TMEM2に連動した細胞外マトリックス動態の変化は、上皮‐間葉相互作用や間質シグナル伝達を制御する経路とも交差します。ヒアルロン酸代謝の破綻やTMEM2発現異常は、線維化や腫瘍関連のマトリックスリモデリングと関連づけられており、微小環境依存的な表現型の研究において重要です。

TMEM2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEM2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMEM2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMEM2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEM2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMEM2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEM2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMEM2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEM2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMEM2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。