TMEFF2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404536-ACT

TMEFF2 (proteína transmembranar com domínio semelhante a EGF e dois domínios semelhantes à folistatina 2) codifica uma proteína transmembranar do tipo I implicada na comunicação célula–célula e na sinalização de fatores de crescimento, com efeitos relatados dependentes do contexto sobre a proliferação, diferenciação e sobrevivência celulares. Por meio de seus domínios extracelulares semelhantes a EGF e à folistatina, a TMEFF2 tem sido associada à modulação de vias ligadas a receptores tirosina-quinase e à regulação de programas transcricionais que moldam comportamentos de linhagens epiteliais e neurais. Alterações na expressão de TMEFF2 foram observadas em múltiplos tipos de câncer, sustentando sua utilidade como um ponto de entrada molecular para estudar estados de sinalização associados a tumores e plasticidade de linhagem. Como a TMEFF2 é localizada na membrana e adjacente a processos de sinalização, ela também é relevante para dissecar como sinais extracelulares são integrados na ativação de vias a jusante e em redes regulatórias gênicas.

TMEFF2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMEFF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMEFF2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMEFF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMEFF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMEFF2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMEFF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMEFF2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMEFF2 em células tumorais com expressão de TMEFF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.