TMEFF2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404536-ACT

TMEFF2（EGF様ドメインおよび2つのフォリスタチン様ドメインをもつ膜貫通タンパク質2）は、細胞間コミュニケーションや増殖因子シグナル伝達に関与するとされるI型膜貫通タンパク質をコードしており、細胞増殖・分化・生存に対して文脈依存的な影響を及ぼすことが報告されています。細胞外のEGF様ドメインおよびフォリスタチン様ドメインを介して、TMEFF2は受容体型チロシンキナーゼ関連経路の調節や、上皮系および神経系の系譜の振る舞いを形作る転写プログラムの制御と関連づけられてきました。TMEFF2の発現変化は複数のがん種で観察されており、腫瘍関連のシグナル状態や系譜可塑性を研究するための分子学的な足がかりとして有用であることを示唆しています。さらにTMEFF2は膜局在でシグナル伝達に近接することから、細胞外からの刺激が下流の経路活性化や遺伝子制御ネットワークへどのように統合されるかを解析する上でも重要です。

TMEFF2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEFF2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMEFF2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMEFF2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEFF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMEFF2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEFF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMEFF2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEFF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMEFF2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。