TMC8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406378

Panoramica

TMC8 (transmembrane channel-like 8; noto anche come EVER2) codifica una proteina di membrana multipasso implicata nella regolazione della segnalazione dei cheratinociti e delle cellule immunitarie, con ruoli riportati nel controllo dell’omeostasi intracellulare dello zinco e delle conseguenti risposte trascrizionali. È stato collegato a vie che influenzano la difesa antivirale, la differenziazione epidermica e la segnalazione infiammatoria, inclusa in alcuni contesti la modulazione di risposte associate a NF-κB. Alterazioni genetiche di TMC8 sono associate a una maggiore suscettibilità all’epidermodisplasia verruciforme e a un controllo dell’ospite modificato delle infezioni cutanee da papillomavirus umano, a sostegno della sua rilevanza nella biologia della barriera cutanea e negli studi sulle interazioni virus–ospite. In quanto fattore associato alla membrana, TMC8 è spesso studiato per comprendere come la segnalazione dipendente dagli ioni si interfacci con l’immunità epiteliale e con la persistenza dell’infezione virale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TMC8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMC8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMC8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMC8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TMC8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMC8 per lo studio della segnalazione di TMC8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMC8 critici per la funzione di TMC8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMC8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TMC8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TMC8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMC8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TMC8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TMC8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMC8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMC8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.