TM6SF2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408066-ACT

Humanes TM6SF2 (Transmembran-6-Superfamilienmitglied 2) kodiert ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes multipassiges Membranprotein, das an der hepatischen Lipidverarbeitung und der Sekretion von Lipoproteinen sehr niedriger Dichte (VLDL) beteiligt ist. TM6SF2 moduliert die Assemblierung triglyceridreicher Lipoproteine und beeinflusst die intrazelluläre Anreicherung von Triglyceriden, wodurch es mit Stoffwechselwegen verknüpft ist, die die Dynamik von Lipidtröpfchen und die ER-Homöostase steuern. Genetische Varianten und eine veränderte Expression von TM6SF2 wurden mit Dyslipidämie und einer erhöhten Anfälligkeit für Fettleber-Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Studien zu metabolischen Lebererkrankungen unterstreicht. Als regulatorischer Knotenpunkt im Lipidfluss von Hepatozyten wird TM6SF2 häufig in Zusammenhängen untersucht, die von Lipidstoffwechsel über entzündungsassoziierte Stressantworten bis hin zu Mechanismen des kardiometabolischen Risikos reichen.

TM6SF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TM6SF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TM6SF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TM6SF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TM6SF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TM6SF2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TM6SF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TM6SF2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TM6SF2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TM6SF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.