TIS11D CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405406-ACT

ZFP36L2は、標的mRNAに存在するAUリッチエレメント（ARE）を認識し、転写産物のポリA尾部短縮（deadenylation）と分解を促進するトリステトラプロリン（TTP）ファミリーに属するヒトRNA結合タンパク質TIS11Dをコードする。TIS11Dは転写後制御を介して、リンパ球の発生、細胞の活性化、分化に関わるプログラムを調節し、炎症およびストレス応答性のシグナル伝達ネットワークと統合されながら、遺伝子発現ダイナミクスを形成する。ZFP36L2活性の変化は、サイトカインや細胞周期関連転写産物の制御不全を通じて、免疫恒常性の破綻や異常増殖と関連づけられており、免疫学および血液疾患研究における重要性を裏づけている。mRNA安定性の制御因子として、TIS11DはRNAターンオーバー、トランスクリプトーム再編成、系譜決定を研究するための扱いやすい要所となる。

TIS11D CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZFP36L2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TIS11D CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZFP36L2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZFP36L2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TIS11Dの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZFP36L2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTIS11D依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZFP36L2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTIS11D経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。