TIM-3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416365-ACT

HAVCR2は、活性化T細胞、制御性T細胞、NK細胞、ならびに骨髄系サブセットに発現する免疫チェックポイント受容体であるT細胞免疫グロブリン／ムチンドメイン含有タンパク質3（TIM-3）をコードします。TIM-3は、ガレクチン9、ホスファチジルセリン、CEACAM1、HMGB1といったリガンド依存的なシグナル伝達を介して、免疫活性化および疲弊プログラムを調節し、TCRシグナルの閾値、サイトカイン産生、自然免疫センシングに影響を与えます。これらの過程は、抗ウイルス応答、腫瘍の免疫回避、骨髄系細胞主導の免疫調節を形作る炎症性および免疫寛容性の経路と交差します。TIM-3の発現やシグナル伝達の変化は、慢性感染、自己免疫、がんに関連する免疫機能障害の状況で観察されており、免疫状態の再構築を示す機序的マーカーとしての有用性を支持しています。

TIM-3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HAVCR2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TIM-3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HAVCR2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHAVCR2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TIM-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHAVCR2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTIM-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHAVCR2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTIM-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。