CRISPR 데이터가 아님: 이 이미지는 CRISPR 실험 결과를 시각화하기 위한 항체 품질을 보여줍니다.
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TIGAR 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-401390-NIC
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- TIGAR Double Nickase Plasmid (h) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
- 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
- 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
- TIGAR 더블 니케이스 플라스미드 (h) 및 TIGAR 더블 니케이스 플라스미드 (h2)는 TIGAR을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 TIGAR Antibody (E-2): sc-166290
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
TIGAR 더블 틈내기효소 플라스미드 (h) | sc-401390-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TIGAR 더블 틈내기효소 플라스미드 (h2) | sc-401390-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
인간 TIGAR(TP53 유도 해당작용 및 세포사멸 조절인자) 유전자는 과당-2,6-비스인산분해효소(fructose-2,6-bisphosphatase) 유사 단백질을 암호화하며, 과당-2,6-비스인산(fructose-2,6-bisphosphate) 수준을 낮춰 세포 대사를 재구성한다. 그 결과 해당작용 플럭스가 억제되고 오탄당인산경로(pentose phosphate pathway) 활성은 촉진된다. NADPH 생성이 증가함에 따라 TIGAR는 산화환원 항상성을 유지하고 활성산소종(ROS)을 제한하여, 대사 조절을 p53 신호전달 하위의 스트레스 반응, 세포사멸, 자가포식 프로그램과 연결한다. TIGAR는 암 생물학을 비롯해 산화환원 균형과 생체에너지 대사가 세포 운명에 영향을 미치는 다른 질환들에서 중요한 대사 재프로그래밍 및 산화 스트레스 적응의 맥락에서 연구되어 왔다. p53 신호전달, 해당작용, 항산화 방어의 교차점에 위치한 결절성 조절인자로서 TIGAR는 인간 세포에서 대사 의존적 표현형을 규명하기 위한 접근 가능한 표적으로 여겨진다.
TIGAR 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 TIGAR 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 TIGAR 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 TIGAR의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.
편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, TIGAR 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.