TIAR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401247-ACT

O TIAL1 humano codifica a TIAR, uma proteína ligante de RNA que reconhece elementos ricos em uridina (U) para regular o splicing de pré-mRNA, a estabilidade do mRNA e a tradução. A TIAR é um componente central dos grânulos de estresse e participa de programas de controle pós-transcricional que remodelam a expressão gênica durante o estresse celular, a sinalização imune inata e a apoptose. Por meio da modulação de transcritos de citocinas e relacionados ao crescimento, a TIAR ajuda a coordenar o metabolismo de RNA com vias de sinalização que governam a proliferação e as respostas inflamatórias. A atividade desregulada da TIAR e a dinâmica dos grânulos de estresse têm sido associadas à neurodegeneração, à autoimunidade e a fenótipos relevantes para o câncer, tornando o TIAL1 um nó útil para estudar redes de regulação por RNA e alterações transcriptômicas associadas a doenças.

TIAR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TIAL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TIAR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TIAL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TIAL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TIAR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TIAL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TIAR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TIAR em células tumorais com expressão de TIAL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.