Tiam2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404326-NIC

TIAM2は、Racに特異的なグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）であるTiam2をコードしており、Rac1/2を活性型のGTP結合状態へと変換することで、上流の受容体シグナルや細胞接着からの刺激をアクチン細胞骨格の再構築へ結び付ける。ラメリポディア形成、細胞極性、フォーカルアドヒージョンのターンオーバーの制御を介して、Tiam2はインテグリン、増殖因子受容体、PI3Kの下流にあるシグナル伝達ノードを含む、細胞移動・浸潤・神経突起伸長を制御する経路に寄与する。TIAM2の活性は、RhoファミリーGTPaseの回路網や、細胞骨格ダイナミクスと転写応答を協調させるMAPK関連プログラムとも交差する。Racシグナルの破綻やTIAM2発現の変化は、複数のがん種において腫瘍細胞の運動性や転移形質と関連づけられており、細胞運動や形態形成の研究における機構的標的としての有用性を裏付けている。

Tiam2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TIAM2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TIAM2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TIAM2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TIAM2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。