TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400153-NIC

TGFBR1は、トランスフォーミング増殖因子β受容体I型（ALK5）をコードしており、TGFBR2と複合体を形成してTGF-βリガンドの刺激を細胞内シグナルへと伝達するセリン／スレオニンキナーゼです。活性化されると、TGFBR1はSMAD2/3をリン酸化してSMAD依存的な転写プログラムを駆動するとともに、MAPK、PI3K/AKT、RhoファミリーGTPアーゼなどの非カノニカル経路とも連携し、細胞周期制御、分化、免疫制御、細胞外マトリックス（ECM）リモデリングに影響を与えます。TGFBR1シグナルの異常は、上皮間葉転換（EMT）の変化、線維化に関連する転写状態、ならびに発生異常やがん生物学で観察される増殖制御の破綻と関連しています。TGF-βシグナル伝達の中核ノードとして、TGFBR1は文脈（コンテキスト）特異的な経路の配線や受容体近傍でのシグナル統合を解明する目的で、しばしば解析対象となります。

TGF beta Receptor 1/TGFBR1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TGFBR1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TGFBR1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TGFBR1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TGFBR1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。