TGase6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404254-ACT

ヒトのTGM6はトランスグルタミナーゼ6（TGase6）をコードしており、Ca2+依存性の酵素として、タンパク質の架橋形成およびトランスアミド化反応を触媒します。これらの反応は、タンパク質の安定性、細胞外マトリックスの組織化、ならびに細胞骨格動態を調節します。タンパク質間相互作用の制御や翻訳後修飾を介して、TGase6は細胞接着、分化、ストレス応答に関連する経路に影響を及ぼし得ます。TGM6の発現およびTGaseファミリーの活性は、神経系および上皮の生物学的文脈で研究されており、架橋形成の恒常性の変化がプロテオスタシスや細胞–マトリックス間シグナル伝達に影響する可能性があります。TGase6の機能異常は、神経生物学に関連する表現型や疾患関連の分子シグネチャーと関連づけられており、転写制御の作用機序や下流経路の再編成を解析するための標的として有用であることが示唆されています。

TGase6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TGM6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TGase6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TGM6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTGM6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TGase6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTGM6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTGase6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTGM6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTGase6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。