TFIIH p80 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402231-ACT

ERCC2 は、ヒト TFIIH p80 ヘリカーゼ（XPD）をコードしており、これは TFIIH 複合体の必須サブユニットです。TFIIH は、ATP 依存的な DNA の巻き戻しを、RNA ポリメラーゼ II による転写開始およびヌクレオチド除去修復（NER）に結び付けます。TFIIH p80 は、転写共役修復およびグローバルゲノム NER における役割を通じて、UV 誘発性光産物のような嵩高い DNA 損傷の認識と除去を可能にし、ゲノム安定性を維持します。ERCC2 はまた、TFIIH による修復と転写プログラムの協調を介して、細胞周期の進行や細胞の DNA 損傷応答にも影響します。病的な ERCC2 変異は、色素性乾皮症、毛髪硫黄欠乏性ジストロフィー（トリコチオジストロフィー）、コケイン症候群などの DNA 修復異常症と関連しており、ERCC2 は NER 機能不全および転写—修復共役の研究に広く用いられる座位となっています。

TFIIH p80 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ERCC2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TFIIH p80 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ERCC2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はERCC2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TFIIH p80の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のERCC2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTFIIH p80依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびERCC2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTFIIH p80経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。