TFIIH p80CRISPR激活质粒(h): sc-402231-ACT

ERCC2 编码人类 TFIIH 复合体的 p80 解旋酶（XPD），这是 TFIIH 复合体的关键亚基，能够将 ATP 依赖的 DNA 解旋与 RNA 聚合酶 II 的转录起始以及核苷酸切除修复（NER）过程相耦联。TFIIH p80 通过参与转录偶联修复和全基因组 NER，在识别并去除体积较大的 DNA 损伤（如紫外线诱导的光产物）方面发挥作用，从而维持基因组稳定性。ERCC2 还通过 TFIIH 对修复与转录程序的协调，影响细胞周期进程及细胞对 DNA 损伤的应答。ERCC2 的致病性变异与多种 DNA 修复相关疾病有关，包括着色性干皮病、脆发性营养不良和 Cockayne 综合征，因此 ERCC2 也是研究 NER 功能障碍及转录-修复偶联机制的常用基因位点。

TFIIH p80 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ERCC2的表达。

TFIIH p80 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ERCC2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ERCC2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性TFIIH p80表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ERCC2位点，并能够研究内源性位点上依赖于TFIIH p80的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ERCC2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TFIIH p80通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。