TFIIH p62 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402239-ACT

GTF2H1は、RNAポリメラーゼIIによる転写開始とヌクレオチド除去修復（NER）を協調させるTFIIH複合体の中核構成要素である、TFIIH p62サブユニットをコードします。TFIIHは、他のTFIIHサブユニットや修復因子との相互作用を介して、プロモーターの開裂、転写開始点の選択、DNA損傷の認識・修復を統合し、基礎転写とゲノム維持を結び付けています。TFIIH機能の変化やNER欠損は、UV感受性や転写共役修復症候群と関連しており、p62が遺伝毒性ストレスに対する細胞応答において重要であることを示しています。TFIIH内で足場様の因子として働くTFIIH p62は、転写制御とDNA修復経路のクロストークを解明するための扱いやすい結節点となります。

TFIIH p62 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GTF2H1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TFIIH p62 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GTF2H1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGTF2H1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TFIIH p62の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGTF2H1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTFIIH p62依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGTF2H1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTFIIH p62経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。