TFEB Double Nickaseプラスミド (m): sc-437332-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TFEB Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- TFEBダブルニカースプラスミド（m）およびTFEBダブルニカースプラスミド（m2）は、Tfebを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TFEB Double Nickaseプラスミド (m) | sc-437332-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスTfebは、CLEAR遺伝子ネットワークを協調的に制御することでリソソーム生合成とオートファジーのマスター調節因子として働く、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）ロイシンジッパー型転写因子TFEBをコードする。TFEB活性は、栄養・ストレス感知経路によって厳密に制御されており、mTORC1依存的なリン酸化は細胞質への隔離と核移行のバランスに影響して、リソソーム機能、オートファジーフラックス、細胞内クリアランスを調整する。これらのプログラムを通じて、TFEBはタンパク質恒常性（プロテオスタシス）、ミトコンドリア品質管理、自然免疫シグナル伝達を形作り、環境シグナルを異化的リモデリングへと結び付ける。TFEBシグナルの破綻は、リソソーム蓄積症様の表現型、神経変性に関連するプロテオトキシックストレス、代謝不均衡、腫瘍細胞のストレス適応と関連づけられており、Tfebは細胞恒常性の機構解明における重要な研究標的である。
TFEB ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Tfeb 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Tfeb内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Tfebの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Tfebが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。