TEL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402207-ACT

ETV6（TEL）はETSファミリーに属する転写抑制因子であり、造血幹細胞および前駆細胞の恒常性維持、系譜決定、ならびにゲノム安定性の維持に必須である。TELは、PNTオリゴマー化ドメインとETS DNA結合ドメインを介して、細胞周期制御、分化、細胞生存経路を形作る転写プログラム（サイトカイン応答性シグナル伝達ネットワークの制御を含む）を統括する。ETV6機能の破綻は血液疾患の病態と強く関連しており、とりわけ、転写制御やクロマチン状態を変化させる反復性の遺伝子融合や機能喪失性変異（病変）として現れることが多い。これらの特徴により、TELは、がん性の転写リワイヤリング、クローン進化、血球発生機構を解明するための重要な研究対象として広く検討されている。

TEL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ETV6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TEL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ETV6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はETV6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TELの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のETV6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTEL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびETV6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTEL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。