Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TdT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423324
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TdT Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TdT, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TdT Antibody (C-11): sc-393710
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TdT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423324 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La DNA nucleotidil-exotransferasi (Dntt) codifica la desossinucleotidil transferasi terminale (TdT), una DNA polimerasi indipendente da stampo che aggiunge nucleotidi non templati alle giunzioni della ricombinazione V(D)J per generare diversità nella regione N. La TdT funziona nei linfociti in via di sviluppo durante l’assemblaggio dei geni dei recettori dell’antigene, influenzando l’ampiezza del repertorio tramite la modulazione degli esiti della giunzione delle estremità e della processazione delle giunzioni. La sua attività si interseca con la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA e con i fattori del non-homologous end joining (NHEJ) che risolvono gli intermedi di ricombinazione. Un’espressione deregolata di Dntt o un’attività aberrante di TdT è ampiamente utilizzata come caratteristica molecolare degli stati linfodi immaturi ed è rilevante per studi meccanicistici dello sviluppo linfode e dell’integrità del genoma durante la ricombinazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TdT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dntt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dntt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dntt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TdT.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dntt per lo studio della segnalazione di TdT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Dntt critici per la funzione di TdT
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dntt per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TdT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TdT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dntt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TdT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TdT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dntt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dntt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.