TDP1CRISPR激活质粒(h): sc-405057-ACT

酪氨酰-DNA 磷酸二酯酶 1（TDP1）是一种 DNA 修复酶，可通过水解 3′-磷酸酪氨酸键，解除停滞的拓扑异构酶 I–DNA 共价复合物，从而在单链断裂修复过程中恢复可连接（可再连接）的 DNA 末端。该活性在转录和复制压力下有助于维持基因组稳定性，并与由 PARP1、XRCC1 和 DNA 连接酶 III 协调的通路相衔接，以处理氧化损伤以及中止连接（abortive ligation）的中间体。TDP1 功能受扰会破坏对拓扑异构酶诱导损伤的修复，并与神经退行性变以及对 DNA 损伤剂敏感性升高相关，凸显其在神经元维持与基因毒性应激反应研究中的重要性。在肿瘤生物学与染色体生物学研究中，TDP1 常被用于探究其在 DNA 损伤耐受、复制叉完整性以及转录相关 DNA 断裂修复中的作用。

TDP1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TDP1的表达。

TDP1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TDP1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TDP1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性TDP1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TDP1位点，并能够研究内源性位点上依赖于TDP1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TDP1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TDP1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。