TDP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405057-ACT

チロシルDNAホスホジエステラーゼ1（TDP1）はDNA修復酵素であり、3′-ホスホチロシル結合を加水分解することで、停止したトポイソメラーゼI–DNA共有結合複合体を解消し、一本鎖切断修復の過程で再結合可能なDNA末端を回復させます。この活性は、転写や複製ストレス下でゲノム安定性を支えるとともに、PARP1、XRCC1、DNAリガーゼIIIによって協調される経路と連携し、酸化損傷や不完全なライゲーションに由来する中間体の処理に関与します。TDP1機能の攪乱はトポイソメラーゼ誘導性損傷の修復を阻害し、神経変性やDNA損傷誘発剤への高感受性と関連づけられており、神経細胞の維持機構や遺伝毒性ストレス応答の研究における重要性を示しています。がん生物学および染色体生物学の研究では、TDP1はDNA損傷耐性、複製フォークの完全性、ならびに転写に伴うDNA切断の修復における役割を評価する対象として、しばしば解析されています。

TDP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TDP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TDP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TDP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTDP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TDP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTDP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTDP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTDP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTDP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。